O Grupo de cromatografia de bioafinidae e Produtos Naturais desenvolve projetos em duas linhas distintas de pesquisa que se inter-relacionam na busca de compostos bioativos de origem vegetal, através do 1) Desenvolvimento e caracterização de reatores enzimáticos para triagem de coleções combinatórias e extratos naturais na busca por ligantes, utilizando-se da Cromatografia Multidimensional e de técnicas hifenadas; e do 2) Desenvolvimento de metodologias cromatográficas para a separação e determinação de micromoléculas bioativas pertencentes a plantas do Cerrado Brasileiro. Nossas linhas de pesquisa buscam desenvolver ferramentas analíticas para triagem dos compostos ativos, sua identificação e caracterização além de sua aplicação nos estudos das interações ligantes- proteínas e da atividade inibitória das substâncias isoladas e/ou extratos brutos sobre enzimas alvo. Como enzimas alvo o grupo tem trabalhado com as Colinesterases (AChE e BChE), a Beta-secretase-1 e principalmente com enzimas dos parasitos Leishmania (NDK e NTPDase-2) e T. cruzi. (NTPDase-1). A cromatografia de bioafinidade e multidimensional é a estratégia escolhida para  desevolver os métodos analíticos que podem ser utilizados tanto em  estudos de atividade quanto na avaliação dos parâmetros cinéticos das enzimas imobilizadas.

http://quimica.ffclrp.usp.br/gcbpn/

The Research Group of  Bioaffinity  Chromatography and Natural Products develops projects in two distinct lines of research that are interrelated in the search for bioactive compounds of plant origin , through 1 ) Development and characterization of enzymatic reactors for screening of combinatorial collections and natural extracts, the search for ligands using multidimensional chromatography and hyphenated techniques; and 2 ) Development of chromatographic methods for the separation and determination of  small bioactive molecules belonging to the Brazilian Cerrado  plants . Our lines of research seek to develop an analytical tool for screening of active compounds and their application in studies of protein interactions ligands- and inhibitory activity of the isolated compounds and / or crude extracts . As enzymes target the group has worked with cholinesterase ( AChE and BChE ) , Beta - secretase enzymes and especially with the Leishmania parasites ( NDK and NTPDase - 2 ) and T. cruzi . ( NTPDase -1). In addition to studies of activity, kinetic parameters of immobilized enzymes can be achieved by developed methods.

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Projeto temático : Ligantes enzimáticos: novos modelos de triagem (

 Como solução ao paradigma de identificar o maior número de compostos ativos em coleções sintéticas e/ou oriundas de extratos naturais, o desenvolvimento de métodos on-line que incorporem identificação e caracterização tem sido explorado. Nesse contexto, o desenvolvimento de novos ensaios de triagem de ligantes de proteínas tem se destacado na procura de hits. Amplamente difundido, o uso de ensaios enzimáticos off-line em solução envolve várias limitações, entre elas a pouca compatibilidade das enzimas com solventes orgânicos. A baixa estabilidade aliada ao alto custo de purificação torna os ensaios on-line utilizando enzimas em solução uma etapa pouco viável para triagem de alta eficiência. Em contrapartida, a realização dos ensaios biológicos on-line, empregando enzimas imobilizadas é uma alternativa valiosa. Os biorreatores ou IMERs (do inglês: Immobilized enzyme reactor) possuem maior estabilidade na presença de solventes orgânicos e variações de temperatura, além de permitir a reutilização e o uso de pequenas quantidades de enzima. Diferentes métodos de imobilização e uma grande variedade de suportes cromatográficos disponíveis ampliam, sobremaneira, as possibilidades de utilização de biorreaotres enzimáticos em estudos on-line, com diferentes formatos e configurações. O uso da cromatografia seletiva de afinidade, utilizando IMERs tem sido explorado com eficiência e demonstrado grandes vantagens como uma das técnicas de triagem de alta eficiência. A cromatografia seletiva de afinidade pode ser explorada através de cromatografia frontal, zonal (linear e não linear). Além disso, a cromatografia zonal pode ser empregada com sistemas 2D hifenadas a diferentes detectores. Enzimas imobilizadas em partículas magnéticas têm sido também eficientemente utilizadas em triagem de ligantes em coleção combinatórias naturais ou sintéticas. O objetivo deste projeto é desenvolver modelos de triagem para os seguintes alvos: ACE, as colinesterases AChE de formiga e humana, e BChE humana, nucleotídeo difosfato quinase (NDK) de Leishmania, NTPDases de T. cruzi e Leishmania e fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK) de T. cruzi e Xantina oxidase (XO).

Apoio Financeiro: FAPESP (2013-01710-1)

Enzymatic ligands: new screening models

Finantial Support: FAPESP (2013-01710-1)

O Grupo de Síntese Orgânica e CLAE do Departamento de Química da UFSCar é coordenado pelas Professoras Quezia Bezerra Cass e Regina Vincenzi Oliveira e tem o laboratório principal "Antonio Pinto Loureiro Filho". Os trabalhos desenvolvidos no grupo são de grande interesse na área tecnológica e dão ênfase principalmente ao desenvolvimento de colunas quirais e colunas de meios de acesso restrito, além de separações em escala multimiligrama de compostos quirais e aquirais. O grupo desenvolve: pesquisas em oxidação enantiosseletiva de sulfetos pro-quirais com oxodiperoxo complexos de molibdênio; métodos, por cromatografia líquida de alta eficiência multidimensional, para análise de compostos orgânicos em fluidos biológicos, e de contaminantes em alimentos e/ou para estudos farmacológicos. Desenvolve, também, pesquisas para identificação de compostos bioativos, utilizando cromatografia seletiva de afinidade, assim como faz desenvolvimentos de métodos por CLAE, aplicados ao controle de fitoterápicos e para análise de fármacos em águas residuais urbanas. Além disso, o estudo do metabolismo de fármacos quirais/aquirais em frações microssomais e a obtenção e identificação de metabólitos gerados por incubação in vitro é um novo desafio do grupo.

O grupo da Professora Juliana Fietto colabora com nossas pesquisas cedento os plasmídeos apra expressão e purificação das atpases de Leismania infantum e T. cruzi.

Responsável pela caracterização e expressão das enzimas nucleosídeo quinases (NDK) de Leisnmania major e seus mutantes.

The Group of Síntese Orgânica e CLAE of the Chemistry Department at UFSCar is coordinated by the Associated Professor Quezia Bezerra Cass and by the Adjunct Professor Regina Vincenzi Oliveira and has the “Antonio Pinto Loureiro Filho” as their main laboratory. The works that are developed in the group are of great interest in the technologic area and their emphasis are mainly related to the development of chiral and restricted access media columns, besides it multimilligram separations of chiral and achiral compounds. The group also develops research in enantioselective oxidation of pro-chiral sulfides, using oxodiperoxo molybdenum complexes; methods using high performance multidimensional liquid chromatography for analysis of organic compounds in biological fluids and contaminants in food and/or for pharmacological studies. In order to obtain identification of bioactive compounds, research based on application of affinity chromatography is under development in the Group, as well as, development of methods using HPLC to quality control of phytotherapic and drugs contaminants in urban wasting water. Moreover, the metabolism of chiral/achiral drugs in microssomal incubation for achieving and identifying metabolites, obtained from in vitro incubation, is the new challenge of the group

The group collaborates with Professor Juliana Fietto our research cedento plasmids apra expression and purification of ATPases of Leismania infantum and T. cruzi .

Responsible for characterization and expression of enzymes nucleoside kinases ( NDK ) Leisnmania of major and its mutants

Publicações

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1)  de Moraes, M.C. ; Cardoso, C.L. ; Vanzolini, K.; Cass, Q. B. . New trends in LC protein ligand screening. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 87, p. 155-166, 2014.

2. de Moraes, M.C ; Temporini, C.; Calleri, E.; Bruni, G.; Ducati, R. G.; Santos, D. S. Cardoso, C. L.; Cass, Q.B.; Massolini, G.. Evaluation of capillary chromatographic supports for immobilized human purine nucleoside phosphorylase in frontal affinity chromatography studies. Journal of Chromatography (Print), v. 1338, p. 77-84, 2014.

3. da SILVA, J. I. ; de Moraes, M.C. ; Vieira, L. C. C. ; Correa, A. G. ; Cass, Q B ; Cardoso, C.L. . Acetylcholinesterase capillary enzyme reactor for screening and characterization of selective inhibitors. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis (Print), v. 73, p. 44-52, 2013.

4. de Moraes, Marcela Cristina ; Cardoso, C.L. ; Cass, Q. B.; Immobilized purine nucleoside phosphorylase from Schistosoma mansoni for specific inhibition studies. Analytical and Bioanalytical Chemistry (Print), v. 405, p. 4871-4878, 2013.

5. Vanzolini, K.; Vieira, L.C.C ; Corrêa, A. G. ; Cardoso, C.L; Cass, Q.B. Acetylcholinesterase Immobilized Capillary Reactors-Tandem Mass Spectrometry: An On-Flow Tool for Ligand Screening. Journal of Medicinal Chemistry, v. 56, p. 2038-2044, 2013.

6. Vanzolini, K.L; Jiang, Z. Zhang, X. ; Vieira, L.C.C .; Corrêa, A. G.Cardoso, C.L.; Cass, Q.B; Moaddel, R. Acetylcholinesterase immobilized capillary reactors coupled to protein coated magnetic beads: A new tool for plant extract ligand screening. Talanta (Oxford), v. 116, p. 647-652, 2013.

7. Vilela, A. F. L. ; da Silva, J.I; Vieira, L. C. C. ; Bernasconi, G. C.R. ; Corrêa, A.G ; Cass, Q.B.  ; Cardoso, C.L. . Immobilized cholinesterases capillary reactors on-flow screening of selective inhibitors. Journal of Chromatography. B (Print), p. 87-93, 2013.

 

8. Cardoso, Carmen Lúcia ; MORAES, M. C. . Immobilized enzymes in the identification of new ligands. In: Norberto Peporine Lopes; Thais Guaratini. (Org.). Analytical Chemistry for Pharmaceutical and Medical Sciences, 2009. 1ed.Kerala: Transworld Research Network, 2009, v. 37, p. 91-109.